Prueba de tamizado para la observación de tenias

 TAMIZADO

OBJETIVO
Es una nueva práctica desarrollada relacionada con el aprendizaje de las tenias, es de gran importancia que sepamos elaborarla de igual manera que las ya realizadas, esta nos dará una apertura total para un diagnostico correcto sobre esta parasitosis.

FUNDAMENTO
La técnica de tamizado Permite observar directamente las características morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados. tal es el caso de los helmintos:Taenia solium y T. saginata.
Es un parásito importante del hombre en aquellos lugares donde el consumo frecuente de la carne de cerdo y de res cruda o insuficientemente cocida, ya que la carne de estos animales puede contener las fases larvarias delas tenias mencionadas, las cuales se denominan céstodos o cisticercos. Después de la expulsión espontánea de proglótidos, estos se pueden recuperar por medio de la técnica de TAMIZADO en heces expulsadas En caso de obtenerse proglótidos, deben comprimirse entre el portaobjetos y observarlos a contra luz o en un microscópico
MATERIAL
*1 coladera de tamiz fino
*1 abatelenguas
*1 caja petri
* 1 pinza
*1 porta objetos
*1 cubre objetos
*Microscopio

PROCEDIMIENTO
1.-Coloca pequeñas porciones de materia fecal en la coladera con el abateleguas
2.-Dispersar la muestra con el abateleguas y agregarle agua asta lograr un tamizado lomas limpio posible.
3.-Revisar cuidadosamente las partículas de las heces que hayan quedado en la coladera.
4.-Los parásitos encontramos colocados en una caja petri con solución salina.
5.-Se identifica la parte del parasito o el completo.
6.-Se reportara el genero y la especie del parasito o parte del parasito.

Conclusión

Apesar de que la tecnica se realizo bien solo se pudieron observar restos de almidon puesto q noestro paciente no estaba enfermo

Método de concentración por flotación de Willis

Este método esta recomendado especialmente para la investigación  de protozoarios y helmintos. Consiste en preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Los huevos y quistes de peso especifico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a subir y adherirse a un cubreobjetos colocado en contacto con la superficie del líquido

Materiales y reactivos

1. Solución saturada de NaCl
2. Solución de Yodo-Lugol
3. Un vaso de precipitado
4. Un embudo
5. Una gasa
6. Un tubo de ensaye
7. Un porta objetos
8. Un cubre objetos

Procedimiento

1. Tomar aproximadamente 1 gr de heces fecales con un abate lenguas.
2. Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezcla con 10 ml de solución saturada de cloruro de sodio.
3. En un tubo de ensaye filtre la mezcla con una gasa, llenando completamente el tubo.
4. Coloque el cubreobjetos sobre el tubo, de manera que el liquido haga contacto con el cubreobjetos.
5. Esperar de 5 a 10 minutos.
6. Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del cubreobjetos que esta en contacto con la mezcla.
7. Colocar una gota de yodo-lugol sobre un portaobjetos, retirar el cubreobjetos con cuidado para evitar perdida del material y ponerlo sobre el portaobjetos.
8. Examinar la muestra al microscopio con el objetivo de 40x, buscando quistes o huevecillos de parásitos.
9. Reportar sus resultados con imágenes.

Observaciones

Se observo la presencia de Entamoeba coli y de huevecillos de Ascaris lubricoide

Entamoeba coli

Huevecillo de Ascaris lumbricoide

Conclusión

Por suerte se lograron observar algunos quiste y la presencia de parásitos y esperamos obtener mas resultados así.

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

OBJETIVO
Conocer y observar  los quistes y huevos mediante un método el cual vamos a hacer y dar  su determinación.

FUNDAMENTO
La prevalencia del parasitismo intestinal es alta en muchos países del mundo y la presencia de parásitos puede estar asociada a diferentes causas entre ellas factores higiénicos sanitarios que son los de mayor incidencia. El diagnóstico de los parásitos intestinales presentes en la población es cada día más necesario y más aun en los países subdesarrollados.
En 1917 Carles y Barthelemy describieron el primer método de concentración por sedimentación utilizando solución salina, éter y formaldehido, años más tarde, en 1948 Ritchie describió un método semejante, el cual hasta la fecha se sigue utilizando. En evaluaciones comparativas con este método, se ha demostrado su utilidad para el diagnóstico de parasitosis intestinales leves o moderadas. El empleo de éter y formaldehido, permite con el primero, liberar las formas parasitarias de las grasas, por disolución de las mismas y con el formol se fijan y conservan. La concentración se hace por centrifugaciones sucesivas.
El diagnóstico de las infecciones parasitarias puede establecerse de dos maneras fundamentales por métodos directos e indirectos. Dentro de los métodos directos se encuentro el método de concentración por sedimentación.
La concentración de huevos, larvas y quistes en heces ha llegado a ser un procedimiento de rutina como parte de un examen completo para la detección de los parásitos intestinales y se puede realizar como complemento del examen directo. Los procedimientos de concentración permiten la detección de protozoos y/o helmintos. Los parásitos se concentran por acción de la gravedad, suspendiendo las heces en agua corriente, agua destilada o solución salina y dejando que sedimenten naturalmente o por centrifugación. Estos métodos son principalmente útiles para la concentración de quistes, Oquistes y huevos.
El examen directo es en nuestras condiciones el menos costoso, pero en muchas ocasiones para poder obtener un diagnóstico certero es necesario el examen seriado de al menos tres muestras, de ahí la importancia de poder utilizar otros métodos. En muchos laboratorios del país se ha empleado la técnica de Ritchie como complemento del examen directo. Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

MATERIAL
·        Centrifuga
·        Gasa
·        Tubos de ensayo cónicos de 15ml
·        Embudo
·        Vaso de precipitado de 50ml
·        Aplicadores de madera
·        Pipetas Pasteur con bulbo
·        Portaobjetos
·        Cubreobjetos
·        Microscopio
·        abate lenguas
Soluciones
·        Salina
·        Eter
·        Formaldehido al 10
·        lugol
Muestra biológica
·        Heces fecales

PROCEDIMIENTO
1.-Con el aplicador de madera o abate lenguas vamos a colocar  aproximadamente 1gr de materia fecal, en el vaso de precipitado, sé añade 10 ml de solución salina y se homogeniza.
2.-Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo recogiendo el filtrado en el tubo cónico
3.-Se centrifuga lo obtenido en el tubo durante 2 por 2000rpm.
4.-Se decante el sobrenadante y se re suspende el sedimento con solución salina. Centrifugando, decantando y re suspendiendo 2 veces más.
5.-No rompemos el sedimento  agregamos 5ml de formaldehido y se mezcla se deja reposar por 10 minutos.
6.-Se añaden 5ml de éter se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente por 30 segundos.
7.- Se centrifuga durante 2 minutos por 2000rpm.
Al término se observaran 4 capas

1.  Éter en la superficie
2. Un tapón de restos fecales
3. Formaldehido
4. Sedimento en el fondo del tubo, contenido de los elementos parasitarios.

8.-Se decanta el sobrenadante.
9.-con la pipeta Pasteur se toma un agota del sedimento y se coloca en el porta objetos.
10.-Se le añade una gota de lugol y se le agrega el cubreobjetos.
11.- Se observa la preparación en el microscopio a 10x y 40x.

Observaciones
Se lograron obsevar fibras musculares y cristales de ácidos grasos, así mismo, varios quistes.

Conclusiones
Esta vez pudimos apreciar algunos quistes de parásitos  La practica fue laboriosa pero es la primera vez que la realizamos y esperamos que al realizarla mas veces se nos hará mas sencillo realizarla

Método C.P.S. Directo o en Fresco

I. Introducción:

Como sabemos uno de los primeros microscopistas fue Antón Van Leewenhoek y  a mediados del siglo XVII fue el primero en utilizar esta método al observar directamente en sus propias heces fecales, trofozoitos de Giardia lamblia.

El método que se necesita menos equipo y el mas sencillo de realizar, corresponde a las preparaciones húmedas, que se hacen directamente con muestras de heces. Para las preparaciones directas de heces frescas o no preservadas, los exámenes ordinarios que hacen solución salina isotónica y lugol. Si se emplean heces preservadas, el formol sirve de diluyente. Las preparaciones no teñidas son de especial valor para el estudio de parásitos vivos, como trofozoitos de protozoarios móviles, hueves de helmintos y larvas de nematodos. El lugol se emplea  principalmente para la búsqueda e identificación de quistes y larvas, con base a sus características.

La mezcla normal en el tracto intestinal por lo general no aseguran una distribución uniforme de trofozoitos de Protozoarios móviles , huevos de helmintos y larvas de nematodos. Sin embargo el examen de la materia fecal directo o en fresco puede revelar o no parásitos dependiendo de la intensidad de la infección.

FUNDAMENTO:

La solución salina isotónica da las condiciones adecuadas para que la célula se mantenga viva. El medio ideal para todo tipo de parásito que pueda encontrarse en las muestras de heces, en cualquier etapa de su desarrollo, es la solución salina fisiológica, y el lugol en la practica ha demostrado su eficacia para la tincion e identificación de parásitos intestinales.

MATERIAL:

• Muestra fecal

• Aplicadores de madera

• Portaobjetos de 25 x 76 mm.

• Cubreobjetos

• Solución salina isotónica

• Lugol parasitológico

TÉCNICA:

1. En un portaobjetos colocar una gota de solución salina isotónica.
2. Con la punta del aplicador tomar una pequeña muestra de aproximadamente 1 a 4 mg. de heces, en muestras con moco y sangre elegir esta parte para estudiar.                                                                
3. Mezclar, procurando hacer una suspensión en preparación delgada y no un frotis.
4. Quitar de la suspensión fibras y otros fragmentos grandes.
5. Colocar el cubreobjetos lentamente procurando no dejar burbujas.
6. Examinar al microscopio en forma sistemática, a seco débil y seco fuerte.
7. Repetir la operación con una gota de lugol en lugar de la solución salina.                                                

Observación:

Se observaron estructuras vegetales así como bacterias comunes de la flora intestinal no hubo presencia de parásitos lo que revelo que los pacientes esta aparentemente sanos.

Conclusión:

Este método coproparasitoscopico en fresco es muy sencillo y no es muy costoso, ya que los materiales ocupados para este examen son pocos. Lamentablemente el examen no arrojo los resultados que esperábamos pero aun así no nos quedamos insatisfechos puesto que ahora tenemos un conocimiento mas para ocupar  en la vida laboral futura y trataremos de identificar mas cosas en las siguientes muestras.